Parótida bovina: purificaçäo e caracterizaçäo da fosfatase ácida de baixo peso molecular / Bovine kidney: purification and characterization of acid phosphatase of low molecular weight

A fosfatase ácida de BPM da parótida bovina foi purificada 1.800 vezes até a homogeneidade, com rendimento de 8 por cento, através de um procedimento envolvendo fracionamento com sulfato de amônio, tratamento ácido e cromatografia de troca iônica em SP-Sephadex com eluiçäo por íon-afinidade. Os critérios de pureza utilizados foram a A.E., PAGE, SDS-PAGE, filtraçäo em gel (Superdex HR 70) e análise da composiçäo de aminoácidos. A enzima purificada (A.E. de 100 µmol min-1 mg-1) é composta por uma cadeia polipeptídica simples e possui Mr de 13,6 e 19 kDa, como determinado através da filtraçäo em gel e SDS-PAGE, respectivamente. A composiçäo parcial de aminoácidos (Cys e Trp näo foram determinados) foi obtida após a hidrólise ácida da proteína purificada seguida da análise dos resíduos de aminoácidos e evidenciou a existência de, pelo menos, 151 resíduos de aminoácidos...

Does gene palB regulate the transcription or the post-translational modification of Pi-repressible phosphatases of Aspergillus nidulans?

When grown on low-Pi medium, the chaA1 pabaA1 palB7 mutant of Aspergillus nidulans excretes an acid phosphatase with steady-state kinetic properties, temperature sensitivity and electrophoretic mobility different from those of the enzyme excreted by the pabaA1 strain. The enzyme excreted by the pabaA1 strain at pH 6.5 showed PNP-P activity with negative cooperativity (K0.5 = 0.87 + or - 0.06 mM, n = 0.68 + or - 0.03) whereas the enzyme excreted by the chaA1 pabaA1 palB7 mutant showed Michaelian kinetics (Km = 0.46 + or - 0.03 mM, n = 1.00 + or - 0.02). The apparent half-lives at 60§C, pH 5.5, of acid phosphatase excreted by the pabaA1 and chaA1 pabaA1 palB7 strains were 58.6 + or - 4.9 min and 21.5 + or - 1.8 min, respectively. Furthermore, the electrophoretic mobility of acid phosphatases excreted by the palA1, palB7, palC4, palE11 and palF15 mutants of A. nidulans was altered and differed from the electrophoretic mobility of the enzyme excreted by the wild-type strain. Also, the palB7 mutation altered the electrophoretic pattern of acid phosphatases synthesized on high-Pi medium. These results are compatible with the post-translational modifications in the Pi-repressible phosphatases rather than with the action of gene palB in controlling the transcription of structural genes of these enzymes